氨基酸的存在形態(tài)
氨基酸在生物體中主要有兩種形態(tài)存在:一種是游離氨基酸,以游離態(tài)存在的單個(gè)氨基酸分子,可被直接吸收利用;另一種是水解氨基酸,需要將待檢產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)、多肽等氨基酸鏈水解成單個(gè)氨基酸,因此,水解氨基酸反映的是產(chǎn)品中所有氨基酸單位(單個(gè)或多個(gè))的組成。
水解氨基酸的前處理方法
確定蛋白質(zhì)的氨基酸組成需要兩個(gè)步驟:
第一步水解,即將蛋白質(zhì)肽鍵打開,釋放出單個(gè)氨基酸,然后進(jìn)行回收。分析樣品的多樣性造成了樣品前處理的復(fù)雜性。有研究顯示,水解的不合理是影響氨基酸分析正確性的首要原因。
第二步分析,即利用色譜技術(shù)對(duì)水解產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析,以確定氨基酸的種類及其含量。
由于氨基酸回收的復(fù)雜性,需要針對(duì)不同類型的氨基酸來(lái)選擇適合的水解方法,主要有酸水解、氧化水解、堿水解、和酶水解。以下針對(duì)較常用的酸水解進(jìn)行介紹。
酸水解法
酸水解法是氨基酸分析中較常用的前處理方法, 22種α-氨基酸中大多數(shù)可采用酸水解法,即用6M高純度的鹽酸將蛋白質(zhì)裂解成單個(gè)游離氨基酸,隨后把殘留的鹽酸蒸發(fā)去除。
水解過(guò)程中使用6M HCl進(jìn)行水解22-24小時(shí),水解后的氨基酸需要取1-2ml溶液放在真空離心濃縮儀中濃縮蒸干,加入2ml水后就繼續(xù)濃縮蒸干,重復(fù)兩次上述操作,以保證去除鹽酸。高濃度鹽酸去除時(shí),由于鹽酸的強(qiáng)腐蝕性,常規(guī)的濃縮儀的管路、真空泵、腔體等部件容易被腐蝕,所以一款真正耐鹽酸的濃縮儀是減少實(shí)驗(yàn)室成本的關(guān)鍵。
耐強(qiáng)酸的溶劑蒸發(fā)工作站
市面上的濃縮設(shè)備有很多種,但真正能耐受高濃度鹽酸、硝酸和TFA的設(shè)備卻不多見。Genevac EZ-2 4.0溶劑蒸發(fā)工作站不僅能耐受6M鹽酸,還能實(shí)現(xiàn)無(wú)人值守、自動(dòng)停機(jī)等功能。
Genevac EZ-2 4.0
耐鹽酸的核心:
1、方便替換的金屬全部由哈氏合金或玻璃替代;其余均用特氟龍密封工藝處理;
2、離心腔、樣品架都通過(guò)PTFE密封工藝進(jìn)行陽(yáng)極氧化處理;
3、聚四氟乙烯制造的蒸汽截止閥和波紋管;
4、真空出口連接器采用聚丙烯制造;
5、密封圈采用杜邦Kalrez全氟醚橡膠,可耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿。
其他優(yōu)勢(shì):
● Sample Guard? 控溫系統(tǒng),防止樣品過(guò)熱;
● Dri-Pure®防暴沸功能:防止樣品暴沸產(chǎn)生交叉污染,避免樣品損失;
● 樣品容器兼容性強(qiáng)、通量高:多種轉(zhuǎn)子可選;
● Sample Genie樣品轉(zhuǎn)移功能:濃縮后可直接將樣品轉(zhuǎn)移至GC小瓶?jī)?nèi)上機(jī)測(cè)試,無(wú)需二次轉(zhuǎn)移;
● 無(wú)人值守,自動(dòng)停機(jī)。
*圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò),旨在分享,如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系刪除
目前,國(guó)家正針對(duì)高校領(lǐng)域設(shè)備購(gòu)置及更新改造提供貸款再補(bǔ)貼,總規(guī)模達(dá)到1.7萬(wàn)億元,至 2022 年 12 月31 日止。
為響應(yīng)國(guó)家新政,德祥科技推出“高校5大學(xué)科儀器耗材推選方案”,旨在助力高??焖俾鋵?shí)設(shè)備儀器購(gòu)置及更新改造。
具體政策及方案介紹請(qǐng)觀看下方視頻。