如果說PCR,也許只有研究人員比較熟悉,但如果說起核酸,相信沒有人不知道。
PCR又稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ,它是一種放大擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)手段 ,被廣泛應(yīng)用于各種領(lǐng)域,如核酸檢測、病毒檢測、親子鑒定等。獲得一小片組織 ,提取DNA再進(jìn)行PCR擴(kuò)增、比對,便可以獲得相應(yīng)的數(shù)據(jù)。
菌落PCR
常規(guī)PCR擴(kuò)增需要進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)、質(zhì)粒制備等多步操作后才能進(jìn)行基因擴(kuò)增,操作繁瑣耗時較長,同時在反復(fù)的操作中DNA量損失也較大,產(chǎn)率較低。
菌落PCR與我們通常的普通DNA的PCR的不同在于,直接以單個菌作為模板。是一種可以快速鑒定菌落是否為含目的質(zhì)粒的陽性菌落。操作簡單,快捷,陽性率較高,在轉(zhuǎn)化鑒定中較常見。
菌落PCR(Colony PCR)可不必提取基因組DNA,不必酶切鑒定,直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,大大節(jié)約了時間和成本。
菌落PCR如何操作?
菌落PCR(Colony PCR)篩選基本步驟:
1. 單菌落挑??;
2. 菌落PCR反應(yīng);
3. 瓊脂糖凝膠電泳;
4. 判斷陽性克隆并測序;
常規(guī)操作過程是用小槍頭挑取單個菌落,先在含抗性的培養(yǎng)皿上畫線,然后蘸取單菌落到畫線格里,蘸取完將單菌落插入反應(yīng)體系中,進(jìn)行后續(xù)PCR反應(yīng)。
Bel-Art 菌落復(fù)制工具可以不費(fèi)吹灰之力地完成繁瑣的菌落復(fù)制任務(wù),增加生產(chǎn)力。Bel-Blotter適合所有類型的96孔板,從平面、v形或圓形的底板轉(zhuǎn)移到0.2ml薄壁PCR板和試管中。只需簡單地將
Bel-Blotter放置在平板上,針尖就會吸收液體,每個針尖可吸收10μl的液體。然后將填充好的Bel-Blotter放入接收介質(zhì)中,無論是平板孔、雜交膜還是瓊脂即可完成菌落復(fù)制。
Bel-Art 菌落復(fù)制工具
菌落復(fù)制工具由聚碳酸酯制成;易于使用,可高壓滅菌,滅菌后可重復(fù)使用。
應(yīng)用:
可用于復(fù)制重組DNA文庫、接種菌落雜交過濾器、PCR、噬菌體分型和其他應(yīng)用。